Pesquisadores da Universidade de Nova York desenvolveram um novo protocolo para usar hibridização genética para gerar linhas GAL4 divididas específicas do gene em Drosophila melanogaster (Drosophila melanogaster), que fornece uma alternativa econômica aos métodos tradicionais de microinjeção. A equipe, liderada pelo Dr. Yu-Chieh David Chen e incluindo Siqi April Li, Hongzhou Gustave Li, Nathalie Shoji e Dr. Claude Desplan, detalhou sua abordagem inovadora na revista STAR Protocols.
“Este protocolo reduz significativamente o custo e a complexidade da criação de linhagens GAL4 divididas em genes específicos, tornando-o acessível aos pesquisadores de Drosophila com foco em uma variedade de tecidos”, disse o Dr. Chen. O trabalho foi publicado na revista STAR Protocols, revisada por pares.
Os pesquisadores descrevem uma abordagem passo a passo, incluindo quatro rodadas de hibridização genética in vivo, genotipagem por PCR e imagens de fluorescência, para garantir a orientação correta da integração split-GAL4 antes de estabelecer populações de moscas estáveis. O processo evita a necessidade de microinjeções, tornando-o mais acessível e barato.
Uma das principais descobertas do estudo é que este novo método é adaptável e pode ser usado para gerar um grande número de meios-drivers de divisão GAL4, o que será crítico para os pesquisadores que estudam diferentes tecidos em Drosophila. Os pesquisadores demonstraram a eficácia de seu protocolo gerando com sucesso linhas GAL4 divididas a partir de linhas MiMIC/CRIMIC existentes, que são amplamente utilizadas em estudos genéticos de Drosophila melanogaster.
O professor Desplan destaca a importância deste desenvolvimento: “Nossa abordagem tem vantagens significativas sobre os métodos tradicionais, reduzindo o tempo e os recursos necessários para criar drivers específicos de genes. Isto irá acelerar a pesquisa em vários campos, incluindo neurobiologia, biologia do desenvolvimento e genética.”
No estudo, os pesquisadores também destacaram a importância dos marcadores fenotípicos para o rastreamento de transgenes durante cruzamentos genéticos. Eles observaram que a rotulagem incorreta poderia indicar contaminação do inventário, o que poderia afetar os resultados. O protocolo inclui instruções detalhadas para manter o inventário de voo e preparar os tampões e reagentes necessários.
Além disso, todo o protocolo pode ser usado como parte de uma experiência de pesquisa de graduação baseada em curso (CURE), que proporciona experiência prática na condução de pesquisas originais em genética de Drosophila. As linhas celulares geradas por este protocolo serão amplamente utilizadas para gerar linhas celulares GAL4 divididas específicas do tipo de célula para beneficiar pesquisadores da comunidade Drosophila.
No geral, o novo protocolo desenvolvido pelo Dr. Chen e seus colegas representa um grande avanço no campo da genética da Drosophila. Ao fornecer uma alternativa económica aos métodos tradicionais, o protocolo visa capacitar investigadores em todo o mundo para permitir uma investigação genética mais ampla e precisa.
Referência do diário
Li, SA, Li, HG, Shoji, N., Desplan, C., & Chen, YD “Protocolo para substituição de linhas de codificação intrônicas MiMIC e CRIMIC por linhas T2A-split-GAL4 em Drosophila usando cruzamentos genéticos.” Protocolo STAR, 2023. doi: https://doi.org/10.1016/j.xpro.2023.102706
Sobre o autor
Yu Jie Chen Davidé pesquisador do NIH F32 e K99/R00 no laboratório do Dr. Claude Desplan na Universidade de Nova York. David é estudante internacional no Howard Hughes Medical Institute (HHMI) e realizou estudos de pós-graduação no laboratório do Dr. Anupama Dahanukar na Universidade da Califórnia, Riverside. Seu interesse de pesquisa de longo prazo é compreender os processos de desenvolvimento e as funções funcionais dos principais sentidos: visão, tato, audição e os sentidos químicos (paladar e olfato), que são essenciais para os organismos perceberem e interagirem com o mundo. David está atualmente no mercado de trabalho docente em busca de um lugar para iniciar seu projeto de pesquisa independente. Seus planos de pesquisa futuros residem na compreensão dos reguladores moleculares por trás de vários eventos de desenvolvimento, como especificação celular, direcionamento axonal e correspondência de parceiros sinápticos, para formar circuitos sensoriais funcionais. mosca da fruta. David também é apaixonado por ensinar e orientar a próxima geração de cientistas. Veja o site dele para mais informações: ycdavidchen.com
Sistema (Aplicativo)formou-se (BA) em biologia pela Faculdade de Artes e Ciências da Universidade de Nova York. Ela é particularmente apaixonada por biologia molecular, pois busca compreender como os processos físicos microscópicos controlam o comportamento dos sistemas biológicos em todas as escalas possíveis. No passado, Siqi estagiou em uma empresa farmacêutica, onde foi encarregada de construir uma plataforma online para comunicar ao público as descobertas da literatura acadêmica. Mais recentemente, Siqi trabalhou como pesquisador voluntário em um laboratório de neuropsicologia, auxiliando em vários procedimentos experimentais. Ela ingressará no laboratório Desplan no outono de 2022 para trabalhar com David Chen no desenvolvimento da ferramenta genética split-GAL4 para marcar novos tipos de células em desenvolvimento. mosca da fruta sistema visual. Inspirada pelas pessoas que conheceu ao longo do caminho, Siqi iniciará seus estudos de doutorado na Escola de Medicina Icahn, no Monte Sinai, no outono de 2024.
Hongzhou (Gustave) Li Em 2024, ele recebeu o diploma de bacharel em neurociência com honras pela New York University Shanghai. Ele se interessou pela neurobiologia em termos das complexas vias biológicas que contribuem para o desenvolvimento e função do cérebro, e é apaixonado por compreender o cérebro de uma perspectiva de baixo para cima. Durante seus estudos de graduação, Gustave trabalhou no laboratório do Dr. Claude Desplan no Departamento de Biologia da NYU e foi supervisionado diretamente pelo pós-doutorado Dr. Yu-Chieh David Chen, onde conduziu pesquisas sobre a geração de ferramentas genéticas para rotular tipos de células neuronais individuais no sistema nervoso central de Drosophila. Ele apresentou seu trabalho em várias conferências acadêmicas e ganhou o prêmio de melhor apresentação de pôster em Biologia do Desenvolvimento e Genética na Conferência Anual de Pesquisa Biomédica para Cientistas Minoritários de 2023 (ABRCMS). A partir do outono de 2024, ele fará doutorado em neurobiologia na Caltech. Ele planeja ingressar na academia e se tornar um pesquisador independente após receber seu doutorado.
